高压锅由内桶和外桶组成，灭菌前需检查外桶底部加热块或加热丝处是否有足够的水，水位应超过加热部分，以防缺水导致加热块融化引发危险。操作步骤：1. 取出内层灭菌桶，向外层锅内加水至水面与三角搁架平齐。2. 放回灭菌桶并装入待灭菌物品，避免装得过挤影响蒸汽流通，注意三角烧瓶和试管口勿接触桶壁，防止棉塞受潮。3. 加盖，将排气软管插入内层灭菌桶排气槽，对称旋紧螺栓确保密封。4. 加热并打开排气阀至水沸腾排出冷空气，关闭排气阀使压力升至1.05kg/cm²（121.3℃），维持20分钟灭菌。5. 灭菌结束后切断热源，待压力自然降至0后打开排气阀，旋松螺栓开盖取出物品。若提前开阀会导致培养基因压力差冲出造成污染。6. 取出培养基置于37℃温箱培养24小时，确认无杂菌生长后备用。
